Práctica LVI 23/04/2015

Determinación celular en tubo

Fundamento:

Los hematíes problema contienen sustancias antigénicas del sistema ABO y se enfrentan a sueros conocidos que poseen anticuerpos frente a esos antígenos. El resultado final es la presencia o no de aglutinación en los hematíes reaccionantes.

Material:

- Tubos de centrífuga

- Rotulador de vidrio

- Pipetas Pasteur

- Centrífuga

- Gradillas

Reactivos:

- Suero anti-A

- Suero anti-B

- Suero anti-AB

- Solución salina fisiológica

Muestra:

- Sangre total anticoagulada.

Desarrollo:

1º. Haremos un lavado de los hematíes problema. Rotulamos un tubo de centrífuga y añadimos 1 ml de la muestra de sangre. Completamos el tubo con solución salina y agitamos para suspender los hematíes. Centrifugamos 4 minutos a 2000 rpm y decantamos el sobrenadante.

2º. A los hematíes del tubo les añadimos una cantidad suficiente de solución salina como para obtener una suspensión al 2%.

3º. Rotulamos tres tubos de ensayo con las letras A, B y AB

4º. Añadimos a cada tubo una gota de la suspensión de hematíes al 2%.

5º. Añadimos dos gotas de suero anti-A en el tubo A, dos gotas de anti-B al tubo B y dos gotas de anti-AB al tubo AB.

6º. Centrifugamos todos los tubos durante 1 minuto a 1000 rpm.

Resultados:

Después de la centrifugación, golpeamos suavemente el fondo de cada tubo para observar macroscópicamente del sedimento, la presencia o ausencia de aglutinación.

Reacción negativa: Los hematíes se resuspenden homogéneamente.

Reacción positiva: Se observa un botón de hematíes que permanecen unidos una vez desprendido el sedimento.

Interpretación:

Es importante destacar que los restos de detergente o sustancias extrañas en los tubos pueden ocasionar falsos negativos.

También pueden darse falsos positivos, por dos motivos:

Por aglutinación no específica y por el fenómeno de Rouleaux, que este consiste en una agrupación no específica de hematíes.

Ejercicios:

1.) ¿Qué tipo de técnica inmunológica se emplea en este análisis?

Una suspensión de hematíes

2.) ¿A qué concentración se prepara la suspensión de hematíes problema?

A una suspensión de 2%

3.) ¿Cómo se ve una aglutinación positiva?

Se observa un botón de hematíes que permanecen unidos una vez desprendido el sedimento.

4.) ¿A qué se debe el fenómeno de Rouleaux?

A una agrupación no específica de hematíes, que adoptan una imagen de pilas de monedas.

5.) ¿Cómo se pueden evitar los falsos positivos?

Con el lavado previo de los hematíes problema.