Práctica
11. Tinción de Giemsa 11/11/2014
1.
Material:
-
Microscopio óptico
-
Portas limpios
-
Cristalizador
-
Puentes de tinción
-
Pipetas Pasteur con chupete
-
Frasco lavador
-
Tubos de ensayo
2.
Reactivos:
-
Colorante en solución según Giemsa de
Panreac
-
Solución tampón pH 7’2 de Panreac.
-
Metanol
-
Aceite de inmersión
3.
Muestra:
Sangre capilar fresca o venosa anticoagulada.
4.
Fundamento:
Se utiliza como colorante la mezcla de azul de
metileno y eosina propuesta por Giemsa. Primero depositaremos el azul de
metileno y más tarde la eosiona.
5.
Desarrollo:
1º. Preparamos una extensión sanguínea.
2º. Colocamos la extensión sobre el puente de tinción,
en el cristalizador en posición horizontal.
3º. Cubrimos la extensión con metanol durante 3
minutos. Lo dejamos secar al aire y nos disponemos a fijar la extensión.
4º. Diluimos en un tubo de ensayo 0’2 ml de
azur-eosina-azul de metileno según Giemsa con 2ml de solución tampón pH 7’2. El
colorante no sería válido para otro día, así que la dilución se hace en el
momento de la tinción.
5º. Mezclamos la dilución del colorante en el propio
tubo, y con una pipeta Pasteur cubrimos la extensión con éste colorante.
6º. Lo lavamos con agua destilada. Más tarde lo
lavamos con tampón pH 7’2 hasta eliminar los restos de colorante. Lo secamos en
posición vertical.
6.
Resultado:
Cuando obtenemos la tinción seca, le echamos sobre
ella una gota de aceite de inmersión y la observamos en el microscopio con el
objetivo de 100x. La gota de inmersión debe tocar un poco al objetivo de 100x.
Podemos ver los eritrocitos teñidos de color rosa y las plaquetas de color
violeta. Los basófilos presentan un núcleo de color púrpura y granulación de
color azul oscuro. Los monocitos y linfocitos se observan con un núcleo color
violeta y el citoplasma azul, más claro en el monocito.
7.
Interpretación:
He obtenido una extensión buena, con sangre capilar de
mi propio dedo índice. Después de hacer la tinción y lavarlo con tampón pH 7’2
hasta dejarlo secar, no he logrado ver leucocitos en el microscopio, aunque sí
he podido ver con claridad los eritrocitos teñidos de rosa.
Ejercicios:
1.)
¿Cuáles
son los anticoagulantes más adecuados para esta técnica?
El EDTA o la heparina.
2.)
¿Con
qué reactivo fijamos el frotis?
Con azur-eosina-azul de
metileno según Giemsa y con la solución tampón pH 7’2.
3.)
¿Cuánto
tiempo debe actuar el colorante en el frotis?
Debe actuar durante unos 25 minutos.
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