Práctica
15. Recuento de hematíes. 20/11/2014
1.
Material:
-
Una pipeta diluidora de thoma para
recuento de glóbulos rojos.
-
Un tubo de goma con boquilla, adaptable a
la pipeta diluidora.
-
Una cámara de recuento con un retículo
tipo Neubauer mejorado.
-
Un cubre.
-
Un microscopio
2.
Reactivos:
-
Líquido de dilución. El más utilizado es
de Hayem, compuesto por:
·
2’5 g de sulfato sódico
·
0’5 g de cloruro sódico
·
0’25 g de cloruro mercúrico
·
100 ml de agua destilada
3.
Muestra:
Sangre capilar obtenida por punción de un dedo o sangre
venosa anticoagulada con EDTA.
4.
Desarrollo:
1º. Situamos un cubre sobre el retículo de la cámara.
Para que queden bien adheridos, se humedece la cámara con H20.
2º. Aspiramos la sangre hasta la señal de 0’5 o hasta
la de 1.
3º. Limpiamos cuidadosamente el exterior de la pipeta con una gasa y sin hacer bajar
el nivel de sangre.
4º. Aspiramos el líquido diluyente hasta la señal 101.
5º. Desenganchamos el tubo de goma de la pipeta y
homogenizamos el contenido del bulbo, sujetando la pipeta por sus extremos y
agitándola suavemente en sentido horizontal durante 2 o 3 minutos.
6º. Desechamos las tres primeras gotas emitidas por la
pipeta. Éstas son el líquido presente en el tubo capilar largo de la pipeta de
Thoma.
7º. Depositamos la siguiente gota entre la cámara y el
cubre. Se ubica en uno de los bordes no adheridos del cubre y la dejamos que
penetre por capilaridad. Hay que evitar que se formen burbujas y que rebose la
sangre diluida por fuera de los bordes del cubre.
8º. Dejamos reposar la sangre diluida durante unos
minutos, para que las células sedimenten.
9º. Enfocamos el retículo con el objetivo de 40x y con
el condensador a baja altura, y verificamos que la distribución de los hematíes
es homogénea.
10º. Contamos los hematíes que hay presentes en 80 cuadrados
pequeños del cuadrado grande central.
5.
Fundamento:
Para éste recuento de glóbulos rojos en cámara, se
diluye la sangre en un líquido apropiado y posteriormente se deposita en la
cámara de recuento. En tal cámara, se cuentan las células presentes en algunos
cuadrados de uno de los retículos.
6.
Resultado:
Se cuentan los hematíes presentes en 5 cuadrados
medianos del cuadrado grande central, y éste tiene 25 cuadrados medianos, así
que multiplicamos por 5 la cifra obtenida en el recuento para calcular el
número de hematíes que hay en un cuadrado grande. Al ser la longitud de cada
uno de los lados del cuadrado grande central de 1 mm, hay multiplicar por 10 el
resultado anterior para saber el número de hematíes existentes, no en 0’1 mm^3,
sino en 1 mm^3. La sangre, al ser diluida, hay que multiplicar el resultado
anterior por 100 o por 200 según por donde se parta la sangre. Para su cálculo
empleamos la siguiente fórmula:
-
RBC = H x 5 x 10 x D
·
RBC: recuento de hematíes
·
H: Hematíes contados en 5 cuadrados medianos
·
D: factor de dilución (100 o 200)
7.
Interpretación:
La disminución del RBC se produce en anemias y su
aumento se da en las policetimias. Se considera normal un RBC comprendido entre
los 4 y los 5’5 millones/mm^3 en las mujeres, y entre los 4’5 y los 6
millones/mm^3 en los varones. Hemos logrado diferenciar tales cuadrados y poder
realizar los ejercicios propuestos al fin. Nos ha resultado difícil comparar un
cuadrado con otro y contar su interior.
Ejercicios:
1.)
¿Qué
se debe de hacer si el líquido de Hayem contiene precipitados?
Deberá ser filtrado antes de usarse.
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