Práctica 12. Tinción Wright

Práctica 12. Tinción de wright. 13/11/2014

1.     Material:

-          Microscopio óptico

-          Cristalizador

-          Puentes de tinción

-          Pipetas Pasteur con chupete

-          Frasco lavador

-          Guantes

-          Tubos de ensayo

2.     Reactivos:

-          Solución de eosina-azul de metileno según Wright

-          Solución tampón pH 7’2

-          Aceite de inmersión

3.     Muestra:

Sangre capilar fresca o venosa anticoagulada. Los anticoagulantes más adecuados son la heparina y el EDTA.

4.     Fundamento:

El colorante que utilizamos es una solución de eosina y una mezcla de azul de metileno (50% al 75%) y azur B (10% al 25%) junto con otros derivados del alcohol metílico. Gracias a la presencia del metanol en la composición del colorante, no es necesario la fijación antes de la coloración. Si queremos guardar la extensión sin teñirla más de un día, haremos su fijación para evitar el deterioro del frotis.

5.     Desarrollo:

1º. Realizar un frotis sanguíneo muy fino y se deja secar.

2º. Vertemos 1 ml de eosina-azul de metileno sobre la extensión colocada horizontalmente en el puente de tinción. Lo dejamos actuar un minuto y lo lavamos con la solución tampón pH 7’2. Lo dejamos secar en posición vertical.

3º. Diluimos 0’5 ml de eosina-azul de metileno y 0’5 ml de solución tampón pH 7’2 en un tubo de ensayo. Lo mezclamos bien y cubrimos la extensión con esta dilución. La teñimos durante 3-5 minutos y lo lavamos con agua del grifo. Lo volvemos a lavar con tampón pH 7’2 y lo dejamos secar en posición vertical.

6.     Resultado:

Obtenemos la extensión teñida para observarla en el microscopio con el objetivo 100x. Aplicamos sobre la extensión el aceite de inmersión y nos disponemos a mirar en el microscopio. El resultado de la extensión es la vista de células que están coloreadas con un color rosado, como en la tinción de Giemsa.

7.     Interpretación:

He podido observar con claridad los eritrocitos de color rosado. La extensión no salió bien, la proporción de sangre no era la ideal, ya que había demasiada. No pude observar, por lo tanto, los leucocitos (ni basófilos, ni monocitos).

Ejercicios:

1.)    ¿Qué tipo de colorante utilizamos en esta tinción?

Una solución de eosina, una mezcla de azul de metileno y azur B

2.)    ¿Qué sustancia empleamos como fijador?

La mezcla de eosina-azul de metileno 0’5 ml y solución tampón pH 7’2 otros 0’5 ml

3.)    ¿Cuánto tiempo debe estar en contacto el frotis con el colorante diluido?

Lo dejamos teñir por unos 3-5 minutos